影响分光光度计吸光值漂移的因素

时间:2022-07-08 14:39:58   访客:614

分光光度计读数不稳定可能是实验者比较头疼的问题。具有更高灵敏度的仪器将表现出的吸光值漂移越大。其实分光光度计的设计原理和工作原理,就是让吸光值在一定范围内变化,即分光光度计具有一定的准确度和精密度。

1、核酸本身的物化性质

检测核酸溶解缓冲液的pH值和离子浓度时,如果离子浓度过高,也会造成读数漂移。因此,建议使用具有一定pH值和较低离子浓度的缓冲液(如TE),可大大稳定读数。核酸的吸光度受 pH 值和缓冲液离子浓度的影响。只有在一定的pH值和低离子浓度条件下(如10mM Tris-HCl pH8.0)才能得到准确的检测结果。水的pH值不稳定,会导致检测误差。一些缓冲液在UV范围内存在自身吸收,为确保准确测量,请使用与悬浮或洗脱样品相同的缓冲液。

试剂3.jpg

2、样品的稀释浓度

样品的稀释浓度也是一个不容忽视的因素,因为样品中难免会有一些细小颗粒,尤其是核酸样本。 这些小颗粒的存在会干扰测试结果。为了尽量减少颗粒对检测结果的影响,要求核酸的吸光值至少大于0.1A,吸光值优选为0.1-1.5A。在这个范围内,粒子的干扰比较小,结果比较稳定。这意味着样品的浓度不能太低或太高(超出光度计的测试范围)。

3、分光光度计操作因素

如混合要充分,否则吸光值太低,甚至为负值;混合液不得有气泡,空白液无悬浮物,否则读数会急剧漂移;测试空白溶液和样品必须使用相同的比色杯,否则浓度差会太大。换算系数和样品浓度单位选择相同;不能使用窗口磨损的比色皿;样品的体积必须达到比色皿要求的zui小体积等多个操作事项。


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