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免疫浊度分析法包括透射免疫比浊法、散射免疫比浊法和免疫胶乳浊度测定法等。由于其反应的特殊性，免疫浊度分析确定该方法易受抗体的性质和质量、抗原与抗体的比例、检测系统等一系列因素的影响。 1- 抗体质量 免疫比浊测定法需要具有强特异性、效价高和强亲和力的抗体。特异性较差的抗血清，由于含有大量的杂抗体，反应后会形成非特异性浊度（“伪浊度”），出现假性升高。使用低效价 (<1:20) 抗体会增加试剂消耗并增加“伪浊度”的产生。 2- 抗体类型 根据抗血清来源的动物种类不同，抗体可分为R型（兔型）和H型（马型）。R型抗体亲和力强，与抗原结合后不易解离。当抗体过量时，容易形成大而稳定的复合物；但当抗原过量时，会形成可溶性复合物。H型抗体亲和力弱，抗原与抗体结合后易解离，且过量的抗原或抗体易形成可溶性复合物。R型抗体是用于免疫比浊测定的较为理想试剂。 小知识 R型 H型抗体的定义 用沉淀反应对不同来源的免疫血清进行比较后，可将抗体按等价带范围大小分为两种类型，即R型抗体和H型抗体。R型抗体的等价带较宽，具有较大的抗原、抗体合适比例范围，与相应抗原结合易出现可见的抗原-抗体复合物，仅在抗原过量时，才出现小分子的可溶性抗原-抗体复合物，如兔、羊的免疫血清。H型抗体的等价带较窄，其抗体与抗原的合适比例范围较窄，抗原或抗体过量，均可形成可溶性免疫复合物，如马、人的免疫血清。 3-抗原、抗体比例 抗原和抗体的比例是浊度形成的关键因素，抗原和抗体必须在一个适当的浓度才会出现最高结合率。当抗原过量时，形成的免疫复合物分子小，而且会发生解离，使浊度下降，光散射减少；当反应液中抗体过量时，免疫复合物的形成随着抗原量的增加而递增，光散射的强度也随之递增。因此，免疫浊度测定的反应体系中必须始终保持抗体过量，以保证免疫复合物的生成量与浊度的改变一致，这是免疫浊度测定的基本原则。 抗体过量必须适量，因此实验中掌握抗体的浓度是关键。一般原则是事先确定某一被测物的正常值，以高于或低于此正常值的50%作为测定范围，抗体在此范围内均应保持过剩。为了减少“伪浊度”的出现，还应对抗原（待测样品）进行适当的稀释。 目前全自动免疫浊度测定仪一般具有抗原过量的自动监测功能，并能对含过量抗原的待测样品进行自动稀释，重新监测。其设计原理是： 在抗体过量的前提下，待测抗原在反应液中与抗体快速反应形成稳定的小复合物颗粒，产生散射光信号，该信号随复合物的增加和时间的延长（在抗体过量阶段）而动态性增强，形成速率峰值信号。在规定时间内反应介质中的抗体应将待测抗原全部结合，无游离抗原存在，此时再次加入已知的相应抗原，该抗原与剩余游离抗体结合反应形成复合物，可出现第二个速率峰值信号，表明第一次速率峰值信号是由全部待测抗原产生，以此速率峰值计算待测抗原的量。如再次加入已知相应后不出现第二速率峰值信号，说明反应介质中已无游离抗体存在，第一速率峰值信号是由于部分待测抗原产生，其测定结果有不准确因素，提示应将待测样本进一步稀释，重新进行检测，以获取全部抗原的真实浓度，保证检测的准确性。 4-反应的条件 抗原、抗体反应液的最适PH值为6.5~8.5，超过此限度则不易形成复合物，甚至可引起复合物解离。在一定范围内，离子强度大，复合物形成快；离子强度过低或无电解质存在，则不易出现可见的沉淀反应。离子的种类也可影响免疫复合物的形成，一般常使用磷酸盐缓冲液作为免疫浊度法的反应液。 5-增浊剂的作用 在反应体系中加入某些非离子型亲水剂，如聚乙二醇（polyethylene glycol, PEG）、吐温 – 20 （Tween – 20）等，可以促进抗原 – 抗体复合物的形成，增加反应速度，其中以PEG8000（一般为MW6000 ~ MW8000）为最常用。增浊剂（亦称促聚剂）的作用是消除蛋白质（抗原、抗体）分子周围的电子云和水化层，促进特异性的抗原、抗体分子靠近并结合形成大分子复合物。反应体系中加入适量的增浊剂，在终点法可以缩短反应时间，速率法可以增加反应峰值。PEG的用量为3% ~ 4%，浓度过高易引起血清中其他蛋白质非特异性沉淀，形成“伪浊度”，影响准确性。 6-标本的因素 高血脂（尤其含有乳糜微粒和其他大分子）标本会较强地引起非特异性光散射，使测定值假性升高。此外，疏水巨球蛋白、内源性免疫复合物、单克隆丙球蛋白由于在PEG作用下可发生凝聚，也可影响测定结果。因此，高浑浊标本不能用于检测。
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